Thesis Number |
level |
Language |
Year |
Bilim Dalı |
|
Yüksek Lisans |
Türkçe |
2020 |
Biyokimya Bilim Dalı |
Bu çalışmada, tekstil sanayinde kullanılan sentetik poliakrilonitril (PAN) kumaşların mikrobiyal olarak modifikasyonu ile özelliklerinin iyileştirilmesi ve fonksiyonelleştirilmesi gerçekleştirilmiştir. Bu çalışma kapsamında Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853), Pseudomonas putida (ATCC 17514), Enterococcus faecalis (ATCC 29212), Pseudomonas oleovorans, Pseudomonas fluorescens (DSM 6521) ve Micrococcus luteus (DSM 20030) mikroorganizmaları kullanılarak nitrilaz enziminin üretimi, üretimin optimizasyonu ve optimum koşullarda PAN kumaşın modifikasyonu yapılmıştır. PAN kumaşlarda karboksil gruplarının oluştuğu ATR-FTIR yöntemiyle belirlenmiştir. Modifikasyon işlemleriyle fonksiyonel grup eklenerek reaksiyona yatkın hale getirilen sentetik kumaşlara, biyoaktif bileşik olarak antimikrobiyal peptid (AMP) PAN kumaşa immobilize edilmiştir. İmmobilizasyonda kullanılan AMP, Enterococcus faecalis (ATCC 29212), Pseudomonas putida (ATCC 17514), Bacillus subtilis (ATCC 6653), Lactobacillus pentosus (DSM 16366) ve Bacillus subtilis (DSM 347) mikroorganizmaları kullanılarak üretimi, üretimin optimizasyonu çalışmaları yapılmıştır. Ayrıca, kromatografik yöntemler ile üretilen AMP'nin saflaştırılması yapılmıştır.
Yaranın enfeksiyonlardan korunması ve iyileşmesine yönelik kullanmak üzere rekombinant Bacillus subtilis 1A752 ile hyaluronik asit (HA) üretiminin gerçekleştirildi, kromatografik yöntemler ile HA saflaştırıldı, viskozimetrik yöntem kullanılarak üretilen HA'nın molekül ağırlığı belirlendi, NMR ile HA'nın moleküler yapısı ve saflık derecesi incelendi, HA kitosan (CS) ile hidrojel hazırlandı ve ardından AMP immobilize kumaşa hidrojelin yüzey aplikasyonu yapılmıştır.
Bu çalışmada, ilaç dağıtımının sürekliliğine yönelik HA'nın biyouyumluluğunun belirlenmesinde in vitro toksisite testleri (sitotoksisite, hemoliz ve irritasyon) başarıyla gerçekleştirilmiştir. Gerçekleştirdiğimiz in vitro sitotoksisite çalışması sonucunda 72 saat sonunda 0,25-1,00 mg/mL dozlarda dahi CCD34Lu hücrelerinin canlılık oranı yaklaşık %100 iken, 1,5 mg/mL dozda dahi CCD34Lu hücrelerinin canlılık oranı yaklaşık %80'di. HA'nın yüksek dozda dahi CCD34Lu hücreleri üzerine sitotoksik etki göstermediği belirlenmiştir. Bu çalışmada gerçekleştirilen hemoliz testi sonucunda HA'nın ve HA/CS'nın kan uyumlu olduğu belirlenmiştir. Tüm veriler istatistiksel olarak değerlendirildi ve sonuçlar istatistiksel olarak anlamlı bulunmuştur. Sonuç olarak B. subtilis 1A752'den elde edilen HA'nın güvenilir bir ürün olarak kullanılabileceğini ortaya konulmuştur.
Projenin son aşamasında, üretilmiş AMP üzerinde antimikrobiyal testler yapılmıştır. Kumaşlar üzerinde ise su tutma kapasitesi ve temas açısı ölçümü, SEM görüntüsü, ATR-FTIR (ham kumaş, modifiye kumaş, AMP immobilize kumaş, hidrojel ürün) gibi karakterizasyon çalışmaları yapılmıştır.
Sonuç olarak; çalışmada geliştirilen Akıllı kumaşın medikal alanlarda kullanılmak üzere endüstriyel ölçekte üretime hazırlık olması açısından önemli bir yol kat edilmiş